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Teacherbot 06 Jul, 00:19:08

Protocolo para obtener ADN de un hisopo con muestra de saliva:

Materiales necesarios: - Hisopo estéril - Tubo de recolección de muestras - Solución de lisis celular (por ejemplo, solución salina tamponada con EDTA) - Solución de extracción de ADN (por ejemplo, fenol-cloroformo) - Etanol al 70% - Centrífuga - Pipetas y puntas estériles - Baño de agua a 55-60 °C - Microcentrífuga

Pasos:

  1. Preparación del hisopo:
    • Asegúrate de que el hisopo esté estéril y sin contaminantes.
    • Abre el tubo de recolección de muestras y coloca el hisopo dentro sin tocar la parte de algodón con las manos.
  2. Recolección de la muestra:
    • Pide al individuo que vaya a proporcionar la muestra de saliva.
    • Instruye al individuo para que frote el hisopo en la parte interna de la mejilla durante aproximadamente 30 segundos, asegurándose de que el hisopo esté en contacto con la saliva.
    • Una vez que se haya recogido suficiente saliva, retira el hisopo de la boca y colócalo nuevamente en el tubo de recolección de muestras.
  3. Lisis celular:
    • Agrega una cantidad adecuada de solución de lisis celular al tubo de recolección de muestras, suficiente para cubrir completamente el hisopo.
    • Asegúrate de que el hisopo esté sumergido en la solución y cierra bien el tubo.
    • Incuba el tubo a temperatura ambiente durante unos minutos para permitir la lisis celular.
  4. Extracción de ADN:
    • Transfiere el contenido del tubo de recolección de muestras a un tubo de centrifugación nuevo y limpio.
    • Agrega una cantidad igual de solución de extracción de ADN (por ejemplo, fenol-cloroformo) al tubo y mezcla suavemente por inversión varias veces.
    • Centrifuga el tubo a alta velocidad durante unos minutos para separar las fases acuosas y orgánicas.
  5. Recuperación del ADN:
    • Transfiere cuidadosamente la fase acuosa (superior) a un nuevo tubo limpio, evitando transferir cualquier precipitado o interfase.
    • Agrega una cantidad igual de etanol al 70% al tubo y mezcla suavemente por inversión varias veces para precipitar el ADN.
    • Centrifuga el tubo a alta velocidad durante unos minutos para obtener un pellet de ADN.
  6. Lavado y secado del ADN:
    • Descarta el sobrenadante y lava el pellet de ADN con etanol al 70% para eliminar cualquier contaminante residual.
    • Centrifuga nuevamente el tubo a alta velocidad durante unos minutos y elimina el etanol sobrante.
    • Deja que el tubo se seque al aire durante unos minutos o utiliza un baño de agua a 55-60 °C para acelerar el proceso de secado.
  7. Almacenamiento del ADN:
    • Una vez que el ADN esté seco, puedes almacenarlo a corto plazo a temperatura ambiente o a largo plazo a -20 °C.

Recuerda seguir las normas de seguridad y utilizar equipo estéril durante todo el proceso para evitar la contaminación de la muestra y obtener resultados precisos.

You 06 Jul, 00:19:57

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Teacherbot 06 Jul, 00:19:57

Protocolo para obtener ADN de un hisopo con muestra de saliva:

Materiales necesarios: - Hisopo estéril - Tubo de recolección de muestras estéril - Solución de lisis celular (por ejemplo, solución salina tamponada con EDTA y proteinasa K) - Solución de extracción de ADN (por ejemplo, fenol-cloroformo-isopropanol) - Etanol al 70% (preparado con agua libre de RNasas y DNasas) - Centrífuga refrigerada - Pipetas y puntas estériles de barrera - Baño de agua a 55-60 °C - Microcentrífuga - Agua libre de RNasas y DNasas - Buffer de elución (por ejemplo, Tris-EDTA pH 8.0)

Pasos:

  1. Preparación del hisopo:
    • Asegúrate de que el hisopo esté estéril y sin contaminantes.
    • Abre el tubo de recolección de muestras estéril y coloca el hisopo dentro sin tocar la parte de algodón con las manos.
  2. Recolección de la muestra:
    • Pide al individuo que vaya a proporcionar la muestra de saliva.
    • Instruye al individuo para que frote el hisopo en la parte interna de la mejilla durante aproximadamente 1 minuto, asegurándose de que el hisopo esté en contacto con la saliva.
    • Una vez que se haya recogido suficiente saliva, retira el hisopo de la boca y colócalo nuevamente en el tubo de recolección de muestras estéril.
  3. Lisis celular:
    • Agrega una cantidad adecuada de solución de lisis celular al tubo de recolección de muestras, suficiente para cubrir completamente el hisopo.
    • Asegúrate de que el hisopo esté sumergido en la solución y cierra bien el tubo.
    • Incuba el tubo a temperatura ambiente durante 10 minutos para permitir la lisis celular.
  4. Extracción de ADN:
    • Transfiere el contenido del tubo de recolección de muestras a un tubo de centrifugación nuevo y limpio.
    • Agrega una cantidad igual de solución de extracción de ADN (por ejemplo, fenol-cloroformo-isopropanol) al tubo y mezcla suavemente por inversión varias veces.
    • Centrifuga el tubo a 12,000 x g durante 10 minutos a 4 °C para separar las fases acuosas y orgánicas.
  5. Recuperación del ADN:
    • Transfiere cuidadosamente la fase acuosa (superior) a un nuevo tubo limpio, evitando transferir cualquier precipitado o interfase.
    • Agrega 0.6 volúmenes de etanol al 70% (preparado con agua libre de RNasas y DNasas) al tubo y mezcla suavemente por inversión varias veces para precipitar el ADN.
    • Centrifuga el tubo a 12,000 x g durante 10 minutos a 4 °C para obtener un pellet de ADN.
  6. Lavado y secado del ADN:
    • Descarta el sobrenadante y lava el pellet de ADN con 1 mL de etanol al 70% (preparado con agua libre de RNasas y DNasas) para eliminar cualquier contaminante residual.
    • Centrifuga nuevamente el tubo a 12,000 x g durante 5 minutos a 4 °C y elimina el etanol sobrante.
    • Deja que el tubo se seque al aire durante 10-15 minutos o utiliza un baño de agua a 55-60 °C durante 5 minutos para acelerar el proceso de secado.
  7. Elución del ADN:
    • Agrega 50-100 μL de agua libre de RNasas y DNasas o buffer de elución (por ejemplo, Tris-EDTA pH 8.0) al tubo y resuspende el pellet de ADN mediante pipeteo suave.
    • Incuba el tubo a temperatura ambiente durante 5 minutos para permitir la completa disolución del ADN.
  8. Almacenamiento del ADN:
    • Una vez que el ADN esté resuspendido, puedes almacenarlo a corto plazo a 4 °C o a largo plazo a -20 °C.

Recuerda seguir las normas de seguridad y utilizar equipo estéril durante todo el proceso para evitar la contaminación de la muestra y obtener resultados precisos. Además, es recomendable utilizar una campana de flujo laminar para minimizar la exposición a RNasas y DNasas.